Explicado: Cinco pasos para detectar el coronavirus (COVID-19)
El proceso fue explicado a The Indian Express por el Dr. V Ravi, Profesor Principal y Jefe del Departamento de Neurovirología, NIMHANS.
Se ve sangre falsa en tubos de ensayo etiquetados con el coronavirus (COVID-19) en esta ilustración tomada el 17 de marzo de 2020. (Reuters) El Dr. V Ravi, profesor principal y director del Departamento de Neurovirología de NIMHANS, explica el proceso de detección del coronavirus para este sitio web . Estos son los cinco pasos:
Recogida y transporte
El centro de pruebas toma hisopos de las cavidades nasales y la parte posterior de la garganta (faringe) y coloca las muestras en un medio de transporte de virus, que contiene sales equilibradas y albúmina para evitar que el virus se desintegre. Luego, la muestra se transporta en almacenamiento en frío al laboratorio de pruebas.
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Extracción de ARN viral
Coronavirus como el SARS-CoV (que surgió en China en 2002-03), MERS-CoV (que apareció en Arabia Saudita en 2012) o el actual SARS-CoV-2 que ha causado la pandemia de COVID-19, tienen grandes , genomas de ARN monocatenario. El laboratorio de pruebas extrae el ARN de las muestras mediante kits disponibles comercialmente (como los fabricados por empresas como QIAGEN).
Poniendo EL ARN en la mezcla de PCR
El ARN extraído se agrega a una mezcla de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Esto incluye la 'mezcla maestra', que contiene una enzima de 'transcriptasa inversa' que convierte el ARN en ADN. La mezcla maestra contiene polimerasa Taq, la enzima que crea copias del ADN, nucleótidos y otros elementos como el magnesio, un ion del cual se necesita para amplificar el ADN.
La mezcla de PCR también contiene 'reactivos' como 'cebadores' y 'sondas'. Los cebadores son hebras particulares de ADN que están diseñadas para unirse con el ADN que se va a copiar; Las sondas se utilizan para detectar la secuencia específica en la muestra de ADN. La OMS ha recomendado cebadores y sondas específicos para las pruebas de COVID-19.
Por último, la mezcla de PCR consta de un gen de mantenimiento: un gen humano normal (RNasa P) que se utiliza para garantizar que las muestras se recojan correctamente y se extraiga el ARN.
Amplificación del ADN viral
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La muestra, en su mezcla de PCR, se coloca en tubos o placas, que luego se colocan en una máquina termocicladora que se utiliza para realizar el proceso de PCR.
Primero, el ARN se convierte en ADN. Entonces comienza el proceso de copiar los genes. El termociclador calienta y enfría la mezcla con la muestra, alternando entre tres temperaturas: para derretir el ADN para separar las dos hebras, para que el cebador se una al ADN y para sintetizar una nueva hebra, todo dentro de un ciclo que dura un minuto. El termociclador ejecuta entre 30 y 40 ciclos de este tipo para amplificar el ADN y detectar el virus.
Prueba contra controles
El ADN amplificado se prueba frente a un control positivo, que generalmente consta de genes del virus clonado en un plásmido, y un control negativo, que es una muestra 'conocida' que ha dado negativo anteriormente para el virus.
La ARNasa P debe mostrar amplificación, el control positivo debe ser positivo, el control negativo debe ser negativo, y luego, cualquier resultado que obtenga de la muestra, es el resultado correcto, dijo el neurovirólogo Dr. V Ravi. Para que una prueba sea válida antes de que se publique el resultado, deben cumplirse ciertos 'criterios de validez'.
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Si el gen de mantenimiento (RNasa P) es positivo, el control positivo es positivo, el control negativo es negativo y la muestra no muestra ningún resultado positivo de PCR, la muestra se declara negativa para el ARN del virus SARS-CoV-2. Si el resultado de la PCR es positivo, el paciente tiene COVID-19.
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